فروش آنزیم  Pfu پلیمراز

0 سفارش
#asan6300
موجود است
تماس بگیرید

توضیحات

آنزیم  Pfu پلیمراز

اطلاعات مربوط به آنزیم Pfu پلیمراز

توصیفات:

Pfu پلیمراز آنزیمی مقاوم به حرارت است که برای تکثیر قطعات DNA مورد استفاده قرار می گیرد. این آنزیم واکنش پلیمریزاسیون نوکلئوتیدها را در جهت ´۵ به ´۳ کاتالیز می کند. آنزیم Pfu DNA پلیمراز همچنین دارای فعالیت اگزونوکلئازی در جهت ´۳ به ´۵ نیز می باشد (خاصیت تصحیح اشتباه یا proofreading) که آنزیم را قادر می سازد اشتباهات خود را در حین انجام واکنش پلیمریزاسیون اصلاح کند.

آنزیم  Pfu پلیمراز

کاربردها:

–         مورد استفاده در واکنش های زنجیره پلیمرازی (PCR) برای تکثیر بدون اشتباه قطعه DNA

–         ایجاد محصولات PCR برای کلونینگ و بیان

–         استفاده در واکنش های RT-PCR برای سنتز cDNA و بیان

–         ایجاد مجصول PCR برای blunt-end cloning

–         جهش زایی هدفمند

منبع:

آنزیم Pfu پلیمراز به صورت نوترکیب از ژن پلیمراز باکتری Pyrococcus furiosus در E.coli تولید شده است.

تعریف واحد آنزیمی (u):

هر واحد (unit) آنزیم Pfu پلیمراز واکنش افزوده شدن مقدار nmole ۱۰ نوکلئوتید (dNTP) را در DNA دو رشته ای در مدت ۳۰ دقیقه در دمای ° C ۷۲ کاتالیز می کند.

 

شرایط نگهداری:

در دمای ° C ۲۰- نگهداری شود. از سرد و گرم شدن (freeze – thaw) زیاد پرهیز گردد.

 

پروتوکل عمومی:

برای انجام واکنش های PCR بهتر است میکس مواد تهیه شده و در انتها آنزیم اضافه گردد. مقدار کلی مواد مورد نیاز برای یک واکنش PCR معمولی در جدول ذیل مشخص شده است:

پرایمر فروارد

۰.۱ – ۱ µM

پرایمر ریورس

۰.۱ – ۱ µM

(dNTP (10mM

۱۰۰ – ۲۵۰ µM

الگو

 ۱ng- ۱ µg

Pfu  پلیمراز

۱ – ۲.۵ u

بافر ۱۰X همراه با MgSO۴

۵ µl

آب فاقد نوکلئاز

متغیر

حجم کل واکنش

µl ۵۰

در صورتی که از بافر ۱۰X فاقد MgSO۴ استفاده می کنید، مقدار ۱.۵ – ۳ mM از محلول MgSO۴ به مخلوط واکنش اضافه کنید.

واکنش های پلیمرازی را با توجه به چرخه های حرارتی زیر انجام دهید:

 

مرحله

دما (° C)

زمان

تعداد چرخه

واسرشت اولیه (First denaturation)

۹۵

۳ تا ۵ دقیقه

۱

واسرشت (Denaturation)

۹۵

۳۰ تا ۶۰ ثانیه

 

۲۵ تا ۳۵ چرخه

اتصال پرایمر (Annealing)

Tm – ۵

۳۰ تا ۶۰ ثانیه

تکتیر (Extension)

۷۲

۲ دقیقه برای هر ۱۰۰۰ جفت باز

تکثیر نهایی (Final extension)

۷۲

۵ تا ۱۰ دقیقه

دیدگاهها

هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.

اولین نفری باشید که دیدگاهی را ارسال می کنید برای “فروش آنزیم  Pfu پلیمراز”

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد.

*

code

برچسب

بالا